多肽类产品将有可能成为新型化妆品原料

多肽类产品从上世纪90年代以来，已迅速成为国际市场畅销药物或保健食品的原料“新宠”。

     在欧洲，93％的多肽原料被用于生产各种治疗药，其余7％为保健食品或化妆品用途。据统计数据，欧洲多肽类产品2004年总销售额高达3亿欧元（折合4亿美元），预期2005年的销售额还将超过这一数字。若按每年平均10％的增长率推算，欧洲市场到2012年的多肽产品总销售额将达到6～7亿欧元。

     目前国际市场上多肽类产品市场销售额约有10多亿美元。美国与日本成为继欧洲市场之后的两大多肽类产品市场。在国外保健食品领域，多肽类产品的供需如何？

     大豆多肽近日，我国自主研发的全新营养食品——提能大豆多肽已经在北京、济南、宁波等11个城市率先面市。大豆多肽是将大豆蛋白水解后得到的一种优质多肽原料，成本十分低廉（在美国市场上粗制大豆蛋白仅需几十美分一磅），而且国际市场对大豆多肽的需求量极大。日本每年消耗大豆多肽约在2000～2500吨，美国大豆多肽生产量估计有4000～5000吨（由美国中央大豆食品技术公司生产），其中部分产品出口至欧洲与日本市场。

     美国研究人员最早报道大豆多肽具有抑制胆固醇升高和降血脂作用；日本学者提出口服一定量的大豆多肽可消除肌肉疲劳和脑疲劳等等；最近法国又有报道说，大豆多肽有抑瘤作用。如今，日美两国均已开发出多种含大豆多肽的保健产品，如运动饮料、口服（降脂）胶囊以及其他健康食品等等。据悉，美国FDA在1998年业已批准凡含有大豆多肽800mg（或大豆分离蛋白20mg）以上的食品均可在其标贴上注明“对心血管有益的食品”的字样。这表明大豆多肽的保健作用已得到美国药品监管机构的认可。

     随着大豆多肽保健作用被越来越多的消费者所认识，相信今后若干年内大豆多肽将成为国际市场上头号畅销多肽类保健食品新原料，其产销量将逼近万吨大关。我国是仅次于美国的巴西的世界第三大豆生产国与出口国，故发展大豆多肽生产具有原料优势。据了解我国已有企业在生产大豆多肽，但产量和出口数量均不高。随着国际市场大豆多肽产品的热销，预期今后几年内大豆多肽出口数量将激增至千吨级。　　

    明胶多肽明胶系从猪皮（或牛皮）、猪骨（或牛骨）中提取的一种蛋白质类调化剂。明胶在食品、医药工业中用途极广。国外研究人员将猪皮明胶进行水解后，得到一种呈淡黄色的“明胶多肽”，既能口服也可直接添加至美容化妆品中。据国外报道，明胶多肽具有出色的美容作用，可以达到嫩肤、保持皮肤水分和消除面部皱纹等功效，如今，明胶多肽在欧洲、美国和日本的化妆品领域已得到广泛应用。估计世界明胶多肽的年产量在5000吨左右。

     据悉，日本厂商另辟蹊径，从水产加工业下脚料——鱼鳞中提取出“鱼鳞胶”，再经酶法分解后得到一种类似于猪皮明胶多肽的新产品——鱼鳞胶多肽，也具有出色的美容作用。日本已建立了鱼鳞胶生产线，年产约15吨，产品主要供应国内化妆品业界。

     丝肽丝肽是日本厂商在上世纪80年代即已开发上市的多肽老产品。“丝肽”原料的制作工艺并不复杂，将蚕丝下脚料（即无法用于织绸缎的蚕丝）进行酶法分解即可得到。丝肽是一种出色的保健食品原料，具有美容、养颜以及抗肿瘤等多重功效。现在日本每年从海外进口大量下脚蚕丝用于生产丝肽，估计年产量至少有上百吨。国际市场上丝肽的缺口较大，而我国是世界主要的蚕丝生产国与出口国，开发丝肽生产具有地利人和的良好前景。

     芝麻多肽芝麻含丰富的蛋白质成分，日本厂商将已榨去芝麻油的芝麻饼粕经酶法水解后得到一种新型多肽——芝麻多肽。研究结果表明，芝麻多肽具有出色的降血压效果，而且散发出天然的香气，所以芝麻多肽可以直接加工成保健食品，是一种天然降压保健产品。

     目前，芝麻多肽面临着广阔的市场前景，比如全球的高血压病患者众多，对降压保健品的需求增大；就日本来说，其生产保健品及其他产品的芝麻多从中国进口，我国企业如果能够自主开发芝麻多肽产品，那么国内外市场对芝麻多肽的需求将为企业带来较好的收入。

     蜂胶多肽“蜂胶多肽”为法国一厂商所开发的多肽新产品，具有特殊的植物香气。据介绍，将蜂胶多肽加工成护肤产品涂擦在面部肌肤上，可以保持弹性、预防细胞老化以及防止皱纹产生。由于美容效果显著。蜂胶多肽产品一上市即受到欧洲众多女性消费者的欢迎。据说12瓶（1．5盎司）Popamino“蜂胶多肽美容水”售价高达70多欧元，但仍供不应求。预计蜂胶多肽将成为国际市场上热销的多肽类新原料药。我国也有蜂胶出产，从资源的角度来看，开发国产“蜂胶多肽”产品的前景也是诱人的。

     多肽产品作为一种新型保健食品、化妆品原料，市场正方兴未艾。除了上述提到的，还有鸡蛋（蛋白）多肽、鱼肉多肽（如沙丁鱼多肽）等等，可以相信，随着科学技术日新月异的发展，今后将有更多的多肽类新品问世。我国资源丰富，拥有众多肽类产品的基本原料，尽快开发国产多肽类产品必将获得丰厚的经济回报

肽[peptide]是α－氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。
由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。它们的分子量低于10，000Da（Dalton道尔顿），能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。也有文献把由2~10个氨基酸组成的肽称为寡肽（小分子肽）；10~50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。

人体自身存在而且必需的活性物质，是人体的重要组成物质、营养物质，它广泛分布于人体各处，特别是大脑里，对几乎所有的细胞都有调节作用。人体缺失了多肽，免疫系统、各功能系统就会发生紊乱，就会出现各种慢性病。

多肽的保存

多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化， 在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。

多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外，这点都会发生， 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用声处理。溶解仍有问题， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，会便于溶解。

要长期保存多肽， 最好冷冻干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。 多肽易受细菌降解，应用无菌纯化水溶解。

含有Met, Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化，寿命有限。应溶于无氧溶剂， 为防止重复冻融的破坏， 建议溶解过量的肽的便实验，其余多肽以固体形成保存。

多肽的溶解性

大多数肽的首选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。

残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。

多肽合成

多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，合成一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的。现在多采用固相 合成法从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，合 成柱和添加的氨基酸的侧链都是被保护的。羧基端是游离的，并且在反应之 前必须活化。化学合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很 多优势，现在大多采用Fmoc法合成。

具体合成由下列几个循环组成：

一、去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去 除氨基的保护基团。

二、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活。激活的单体 与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反 应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。 洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFAl） 洗脱和脱保护。

HPLC分析和纯化

分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。

HPLC分两类：离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。 分离是一种电荷相互作用，通过可变PH， 离子强度， 或两者洗脱出多肽，通常， 先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。

反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱， 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的， 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而，总体实践中， 这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成， 比如苯基。

典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)

大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸钠/氨，TFA/TEA，磷酸钠或钾，异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意一点：硅反相柱料不能长时间暴露于高pH，甚至微碱pH， 因为这样会破坏柱子。

不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys ）的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。