【专题】化妆品微生物学之六：金黄色葡萄球菌的检测

化妆品中金黄色葡萄球菌的检测
    1．检测金黄色葡萄球菌的意义
    金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，因能产生金黄色色素而得名。它为革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界、空气、土壤及水，可在人体皮肤、鼻腔、咽喉等处生存，耐热性强，对于干燥和紫外光的抵抗力亦较大，为一种致病菌，可通过多种途径侵入机体，导致各种疾病和可引起皮肤或器官的多种化脓性感染(故它又名为化脓性葡萄球菌)，严重时可导致败血症。国内外膏霜类化妆品中曾检出此种细菌，因此，在化妆品中检测葡萄球菌具有重要的卫生意义，我国化妆品卫生标准中规定：在化妆品中不得检出葡萄球菌。
    2．金黄色葡萄球菌和生化特性
    金黄色葡萄球菌菌体呈圆球形，直径0．8～1．0／lm，常成堆排列成葡萄状，有时可单个、成双或成短链；它为需氧或兼性厌氧类细菌，在普通营养培养基上即可生长繁殖；能在高浓度的食盐(7％一9％)中生长繁殖，能耐高达15％的食盐。利用此特性可与其他菌分离鉴别；它在生长繁殖过程中，在培养基上可代谢产生金黄色脂溶性色素，但也有变异菌
株产生浅黄或白色色素；它能分解多种糖类，能分解甘露醇，产酸；还可液化明胶；它的另一个特性是能产生溶血素，可使血液培养基的红细胞溶解，在菌落周围产生溶血圈；金黄色葡萄球菌还能产生血浆凝固酶，能使抗凝的兔或人的血浆发生凝固，其试验方法有两种：玻片法和试管法，葡萄球菌所产生的血浆凝固酶有两种：一种为结合凝固酶，它是结合在细菌的细胞壁上，直接作用于血浆中的纤维蛋白，使细菌凝成块状，玻片法试验的阳性结果是由此酶形成；另一种是在菌体内产生释放到菌体外，称为游离血浆凝固酶，它能使血浆中的凝血酶原变为凝血酶类产物，试管法的阳性结果是由此酶形成的。
  3．检验操作及结果报告
    (1)检验操作步骤
    增菌培养：将试样液稀释无菌操作加  SCDLP液体培养基中，置37'C培养24h，进行增菌培养。也可在含7．5％的氯化钠肉汤培养基中进行增菌培养。
    分离培养：从前增菌培养液中，取l～2接种环，划线接种到Baird-Pairker氏培养基或血琼脂平板上，置3712培养24～48h。BairdPairker琼脂培养基中的氯化锂可抑制革兰氏阴性菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长；卵黄亚碲酸钾增菌剂中氯化钠用量大，可抑制某些细菌的生长，而卵黄中的卵磷脂有促进金黄色葡萄球菌生长和鉴别的作用。
    观察培养基所形成的菌落，血琼脂培养基的葡萄球菌菌落颜色鲜明，茵落较大(1～2mm)，有溶血反应，菌落周围产生溶血圈，容易检出。
    证实试验：
    ①染色镜检：取可疑金黄色葡萄球菌菌落，进行革兰氏染色、镜检试验。
    ②甘露醇发酵试验：取可疑菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37℃培养24h，金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，使培养基产酸。
    ③血浆凝固酶试验：分别进行玻片法和试管法试验，将待检菌落与滴加在玻片上的血浆和生理盐水研磨，5min内，血浆凝成块状或颗粒状，而盐水玻片上无凝固现象，这时玻片试验为阳性；试管法试验，需经24h培养，血浆凝固时为阳性。；
    (2)结果报告  被检试样液经增菌、分离培养后，观察菌落疑似金黄色葡萄球菌，证实与革兰氏阳性葡萄球菌，并甘露醇发酵试验及血浆凝固酶试验均为阳性，即报告检出金黄色葡萄球菌。
    在检验金黄色葡萄球菌时，血浆凝固酶试验为主要指标。故若疑似菌落革兰氏阳性，不发酵甘露醇(甘露醇发酵试验阴性)，但血浆凝固酶试验阳性，这时也可断定检出金黄色葡萄球菌。
    对疑似菌落，其革兰氏阳性，若甘露醇试验阴性，有血浆凝固酶试验阴性，这时可断定为未检出金黄色葡萄球菌。