【专题】化妆品微生物学之五：绿脓杆菌的检测

化妆品中绿脓杆菌的检测
    1．检测绿脓杆菌的意义
    绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为革兰氏阴性细菌，属假单胞菌属。它在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在，在潮湿处可长期生存，对外环境的抵抗力比其他细菌强，抗干燥的能力也强。
  含水分较多的原料、化妆品易受其污染，绿脓杆菌对人类有致病力，常引起人体的眼、皮肤等处感染，特别是烧伤、烫伤及外伤患者感染上绿脓杆菌常使病情恶化，严重时可引起败血症，眼睛受伤感染后可使角膜溃疡并穿孑L，严重可致失明。目前，该菌已是防止医院感染和药品、化妆品及水等必须严加控制的重要病原菌之一。我国化妆品卫生标准规定：在化妆品中不得检出绿脓杆菌，因此，在化妆品中检测绿脓杆菌具有重要意义。
    2．绿脓杆菌的生化特性
    绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，有鞭毛，能在普通培养基上生长繁殖，为需氧及兼性厌氧类细菌。绿脓杆菌能代谢产生一种绿色的水溶性色素，使培养基变成绿色，受它而引起的化脓感染，脓液就常带绿色，因此而定名为绿脓杆菌。
    绿脓杆菌可分解葡萄糖；对明胶具有液化、溶解作用；能还原硝酸，盐成为亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氢气；绿脓杆菌具有氧化酶(靛基氧化酶)能将试剂(盐酸二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺)氧化成红色的醌类化合物；还可在42℃的温度下生长繁殖。绿脓杆菌的这些生化特性常用来作为分离和鉴别它的方法。
    3．检验操作及结果报告
    (1)检验操作步骤
增菌培养：将试样液稀释无菌操作加入SCDLP液体培养基中，置37'E进行24h分离培养。该类培养基选择性强，大肠杆菌不能生长，革兰氏阳性菌生长完全受到抑制。观察培养基上所形成的菌落，典型绿脓杆菌菌落特征是菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩张有水溶性色素。
证实试验：
    ①染色镜检：取上述可疑为绿脓杆菌的菌落，进行革兰氏染色、镜检试验。
    ②氧化酶试验：挑取可疑菌落(同上)置于滤纸片上，滴加一滴新配制的5％二甲基对苯二胺试剂，15~30min内，出现红色至紫红色，为氧化酶试验呈阳性；若不变色，为氧化酶试验阴性。
    ③绿脓菌素试验：取可疑菌落2"-3个，置于绿脓菌素测定用培养基上，于37C培养24h，加入氯仿，色素溶于其内后，加入盐酸，上层稀盐酸液内出现红色时为阳性，表示菌落中含有绿脓菌素。
    ④明胶液化试验：将可疑菌落的纯培养物，接种于硝酸盐胨水培养基中，置37C_,培养24h，取出放人冰箱10～30min，如有溶解，即明胶液化试验呈阳性；如凝固不溶，则明胶液化试验呈阴性。
    ⑤硝酸盐还原试验：挑出被检纯培养物，接种于硝酸盐胨水培养基中，置37℃培养24h，在培养基中的小倒管内有气体者，试验呈阳性，表明该菌能还原硝酸盐并将亚硝酸盐分解产生氢气。
    ⑥4213生长试验：挑取纯被检物，接种于普通琼脂斜面培养上，于42'C培养48h，绿脓杆菌能生长为阳性反应。
    (2)结果报告  被检试样液经增菌、分离培养后，观察菌落，对疑似绿脓杆菌菌落，证实为革兰氏阴性杆菌，且氧化酶、绿脓菌素试验都呈阳性，则报告试样检出绿脓杆菌；若其中绿脓菌素试验为阴性，但明胶液化试验、硝酸盐还原试验及42C生长试验都为阳性，这时也报告测试物被检出绿脓杆菌。