【专题】化妆品微生物学之四：粪大肠菌群的检测

化妆品中粪大肠菌群的检测
    1．检测粪大肠菌群的意义
    粪大肠菌群是生长于人和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1／3以上，故称为粪大肠菌群。受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染。因此粪大肠菌群可以作为水、食品、饮料、化妆品等被粪便污染的标志，我国化妆品卫生标准规定，在化妆品中不得检出粪大肠菌群，在化妆品中若检出有粪大肠菌群，即表明该化妆品已被粪便污染，这时，一般该化妆品的菌落总数均很高。被粪便污染的化妆品中可能有肠道致病菌存在，经消费者使用等途径进入人体后，可引起肠道性疾病，故这种化妆品对消费者存在潜在的危险性。
从对化妆品微生物污染状况检测表明，在三种微生物(粪大肠菌群、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌)对化妆品的污染中以粪大肠菌群超标比例最高，可见在对化妆品进行卫生监督时，检测粪大肠菌群具有重要意义。
    2．粪大肠菌群的生化特性
粪大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是根据卫生学方面的需要，而设定的一类与粪便污染有关的一组细菌。粪大肠菌群为一群需氧及兼性厌氧的菌群，呈革兰氏阴性反应，能在普通培养基上生长繁殖；其生化活动能力较强，能发酵多种糖类，产酸产气，其特点是能较快发酵乳糖，粪大肠菌群在乳糖培养基中于．37℃下进行培养，在24h内能使乳糖发酵产酸，还有甲酸解氢酶进行分解甲酸，生成氢气和二氧化碳，产生大量气体，这时，若加入伊红美兰指示剂，分解乳糖所产生的酸(带阳电荷)与伊红相染呈紫色且有金属光泽，故常用此特性来鉴定识别粪大肠菌群。
3．检测操作程序及报告
(1)发酵(产酸产气)试验  将试样液以无菌接种于双倍乳糖胆盐发酵管(其内放有倒置的小玻璃管，以收集气体)内，置44'E培养箱中培养24—48h，由于乳糖胆盐培养基是一种具有选择作用的培养基，其中胆盐具有抑制革兰氏阳性菌的作用，若观察到发酵管内不产酸(有酚红指示剂指示)不产气，则报告试样为粪大肠菌群阴性，未检出，检测结束。
若发酵管内产酸产气，则继续进行下列检测。
    (2)鉴别培养  将有产酸产气的发酵管内试样培养液接种到伊红美兰琼脂培养基平皿上，置37℃培养18～24h；同时将该培养液接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。
    (3)验证实验  菌落观察：在上述平皿培养基上，仔细观察菌落生长情况：大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上其典型菌落是呈深紫色、圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、常具有金属光泽，或呈紫黑色不带或略带金属光泽及粉紫色，中心较深的菌落。
    革兰氏染色、镜检：将以上典型的(或近似的)大肠菌群菌落进行革兰氏染色、镜检，若革兰氏染色呈阳性(紫色)反应，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。若革兰氏染色呈阴性，检测还需进行下一试验，以待进一步证实。
    靛基质试验(吲哚试验)：对前已培养好的蛋白胨水中，滴人靛基质试剂(对二甲基氨基苯甲醛试剂)，进行靛基质反应，若液面呈玫瑰红色，呈阳性反应，则报告粪大肠菌群呈阳性，检出；若液面仍是棕黄色，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。
    (4)检测程序  将上述检测粪大肠菌群的操作步骤可归结为以下程序图(1)示。
    (5)检验报告  当发酵管内产酸产气，观察试液平皿上为典型粪大肠菌群菌落，并经革兰氏染色、检镜试验为阴性(—)及靛基质试验为阳性( )，则报告该试液经检测检出粪大肠菌群。如上程序图所示其他结果均为未检出粪大肠菌群。