标准平板计数法检测化妆品细菌总数测定

中华人民共和国国家标准
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 UDC 668：576 .85.07
(GB7918.2－87)
Standard methods of microbiological examination for cosmetics Standard plate count

细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌，数量。测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。

1 方法提要
化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理物质性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。

2 培养基和试剂
2.1 生理盐水：见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法 总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基
成分： 蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15g
卵磷脂 1g
吐温80 7g
蒸馏水 1000ml
制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.2，加入琼脂，121℃(15 1b)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。

3 仪器
3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿：直径9cm。
3.7 灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。

4 操作步骤
4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平甲内，每皿1ml。另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中(注重勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，使成1:100稀释液。吸取2ml,分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml。如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，••••••等，每种稀释度应换1支吸管。
4.2 将熔化并冷至45～50℃的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待不琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h。

5 菌落计数方法
先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后。求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，面其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

6 菌落计数及报告方法
6.1 首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表中例１）。
6.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数(见表中例2及例3)。