化妆品微生物检验方法－实用技术手册

　　1　化妆品各种原料染菌的检验方法同化妆品产品的微生物检验方法

　　2　生产化妆品用水的染菌检验

　　2．1　细菌总数

　　以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到46℃左右的营养琼脂培养基（1），并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应平行接种二个平皿，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。待冷却凝固后，翻转平皿，使底面在上，置于37℃恒温箱内培养24小时，进行菌落计数，即为1ml水中的细菌总数。

PS：细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基（1）中，于37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

　　2．2　粪大肠菌群
　　2．2．1　发酵法
　　以无菌操作吸取水样10ml，加到装有10ml双倍浓度乳糖胆盐培养基试管中（内装小倒管），共接种5管，以下操作步骤同化妆品粪大肠菌群检验方法。
　　结果判定：根据试验证实为粪大肠菌群阳性或阴性的管数，查粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表，报告每100ml水中的粪大肠菌群最可能数。　

　
　　2．2．2　滤膜法
　　滤膜是一种微孔薄膜，孔径为0．45μm，能滤过大量水样，将水中含有的细菌截留在滤膜上经培养可计数。
　　使用前应先将滤膜灭菌，灭菌方法可用水浴煮沸，连续灭菌3次，每次15min，每次煮沸灭菌后需更换水并洗涤2～3次，以除去残留溶剂。也可用高压灭菌。所用滤器可用高压或火焰灭菌。

　　用无菌镊子加住滤膜边缘，将粗面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100ml水样注入滤器中，进行抽滤，滤完后，再抽气约5秒钟，取下滤器，用无菌镊子夹住滤膜边缘，移放到MFC培养基（2）上使滤膜截留细菌面向上，并紧贴培养基，两者间不得留有气泡，盖好皿盖，翻转平皿，将平皿放到44．5℃隔水式培养箱中，或放到防水塑料袋中，封好，将塑料袋浸到44．5℃水浴中，培养24小时。粪大肠菌群菌落为蓝色，非粪大肠菌群菌落为灰色至奶油色，计数典型菌落数。如有介于两者之间的典型菌落，可经涂片染色镜检和复发酵试验以证实之。

　　2．3　其他菌（绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌）的检验
　　这二种菌在水中的污染量不多，故应先将水样浓缩集菌，可用滤膜过滤方法，将细菌阻留在滤膜上，将滤膜放到相应的分离培养基上培养，如检验绿脓杆菌就放到十六烷三甲基溴化铵平板上，或乙酰胺琼脂平板上；检验金黄色葡萄球菌时就将滤膜放到血琼脂平板上，或B．P琼脂平板上，以下检验步骤同化妆品检验。

　　注解：

　　（1）营养琼脂培养基的成分和制法同普通营养琼脂斜面。

　　（2）MFC培养基
　　成分：胰胨　　　　　　　　　　　　5g
　　　　　酵母浸膏　　　　　　　　　　3g
　　　　　氯化钠　　　　　　　　　　　5g
　　　　　乳糖　　　　　　　　　　　　12．5g
　　　　　胆盐3号（bile salt No．3）　 1．5g
　　　　　或混合胆盐
　　　　　琼脂15g
　　　　　苯胺蓝（aniline blue）　　　 0．2g
　　　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　1000ml